人多能性干細胞無血清培養(yǎng)基

StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ

人多能性干細胞無血清培養(yǎng)基

　　本產品是無飼養(yǎng)層條件下用于維持培養(yǎng)人ES細胞·iPS細胞的無血清,無動物源性成分的液體培養(yǎng)基。不含BSA及HAS等蛋白，批次間的差別較少，結果穩(wěn)定。但是，本產品不含bFGF（堿性線成纖維細胞成長因子）。

◆特點

●　無血清、無飼養(yǎng)層培養(yǎng)人 ES· iPS 細胞

●　使用人 iPS 細胞 201B7 細胞系，進行每批次的質量檢測

●　不含動物源成分

●　不屬于醫(yī)藥用外毒物或劇毒物，保存及處理簡單

●　不含蛋白的低蛋白培養(yǎng)基

●　可使用 Matrigel^® 、iMatrix-511、Vitronectin 等培養(yǎng)基質

●　可使用 Accutase, TrypLE Select 等解離液

●　傳代培養(yǎng)時添加 Y-27632 可傳代培養(yǎng)單細胞

◆檢測項目

● 細胞繁殖能力測試（使用人iPS細胞201B7細胞系）

● 堿性磷酸酶染色（使用人iPS細胞201B7細胞系）

● 無菌檢測

● pH

● 滲透壓

● 內毒素

● 支原體檢測

◆使用注意

● 本產品不含bFGF（堿性成纖維細胞成長因子）。

● 本產品需冷藏（-20℃）。溶解后無需再冷凍，請保存于２～10℃，并在１周內使用完畢。

◆人iPS細胞201B7細胞系

　　將使用Ａ公司培養(yǎng)基（含有 BSA、使用動物源成分）培養(yǎng)的人iPS細胞201B7細胞系移植到 StemSure^® hPSC培養(yǎng)基Δ，進行傳代培養(yǎng)。下圖為傳代移植培養(yǎng)時的細胞形態(tài)及細胞集団倍增數(shù)、未分化性標記表達結果。

《 細胞形態(tài) 》

　　使用 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ培養(yǎng)的人iPS細胞的形態(tài)與Ａ公司培養(yǎng)基的幾乎相同，沒有發(fā)生分化，穩(wěn)定地進行了培養(yǎng)。

《 細胞群倍加數(shù) 》

　　對比移植到 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ后的第１代到第５代的細胞，使用 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ的細胞繁殖狀況更好。

 ＜ 培養(yǎng)基成分 ＞　
　　StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ + 35 ng/ml bFGF

＜ 細胞播種數(shù) ＞　
　　1×10⁵ cells/well（使用６孔培養(yǎng)板）

《 未分化性標記表達確認 》

　　使用 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ培養(yǎng)至５代，觀察到全部的未分化標記物（Nanog, Oct3/4, Tra-1-60, SSEA-4, BC2LCN）。 　

　　　※BC2LCN 是能與存在于人 ES ?iPS 細胞膜表面的糖鏈特異性結合的重組凝集素。

＜ 培養(yǎng)基成分 ＞　
　　StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ + 35 ng/ml bFGF

＜ 細胞播種數(shù) ＞　
　　1×10⁵ cells/well（使用６孔培養(yǎng)板）

《 未分化性標記表達確認 》

　　使用 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ培養(yǎng)至５代，觀察到全部的未分化標記物（Nanog, Oct3/4, Tra-1-60, SSEA-4, BC2LCN）。 　

　　　※BC2LCN 是能與存在于人 ES ?iPS 細胞膜表面的糖鏈特異性結合的重組凝集素。

＜數(shù)據(jù)提供　獨立行政法人產業(yè)技術綜合研究所 干細胞工學研究中心 小沼泰子老師、伊藤弓弦老師＞

◆人ES細胞201B7細胞系

　　將使用Ａ公司培養(yǎng)基（含有 BSA、使用動物源成分）培養(yǎng)的人ES細胞201B7細胞系移植到 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ，進行傳代培養(yǎng)。下圖為傳代移植培養(yǎng)時的細胞形態(tài)及細胞集団倍增數(shù)、未分化性標記表達結果。

《 細胞形態(tài) 》

　　使用Ａ公司培養(yǎng)基的細胞，細胞在第２代以后出現(xiàn)了分化。另一方面，使用 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ的細胞，沒有發(fā)生分化，穩(wěn)定地進行了培養(yǎng)。

《 細胞群倍增數(shù) 》

　　比較兩者移植到 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ后的第１代到第５代，細胞的繁殖能力沒有差異。

＜ 培養(yǎng)基成分 ＞　
　　StemSure^® hPSC培養(yǎng)基Δ + 35 ng/ml bFGF

＜ 細胞播種數(shù) ＞　
　　1×10⁵ cells/well（使用６孔培養(yǎng)板）

《 未分化性維持確認 》

　　使用 StemSure® hPSC 培養(yǎng)基Δ培養(yǎng)至第６代，觀察到全部的未分化標記物（Nanog, Oct3/4, Tra-1-60, SSEA-4, BC2LCN）。 　　

　　　※BC2LCN 是能與存在于人ES ?iPS細胞膜表面的糖鏈特異性結合的重組凝集素。

＜數(shù)據(jù)提供　獨立行政法人產業(yè)技術綜合研究所 干細胞工學研究中心 小沼泰子老師、伊藤 弓弦老師＞

核型解析

　　對使用 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ培養(yǎng)到第27代的人iPS細胞進行了核型解析，沒有發(fā)現(xiàn)染色體異常。　

＜數(shù)據(jù)提供　　獨立行政法人國立成育醫(yī)療研究中心研究所 再生醫(yī)療中心 三浦巧老師、阿久津英憲老師＞

人iPS細胞201B7分化成三胚層

　　使用 StemSure^® hPSC 培養(yǎng)基Δ將人iPS細胞201B7細胞系培養(yǎng)至第３代，再使用 StemSure^® 系列培養(yǎng)基進行馴化培養(yǎng)，可觀察到 βⅢ-Tubulin、α-SMA、AFP，因此判斷細胞形成胚體后，進行了三胚層分化。

＜ 培養(yǎng)基成分 ＞
　　StemSure^® D-MEM + StemSure^® Serum Replacement + 2 mmol/l L-Glutamine + 10 mmol/l StemSure^® 2-Mercaptoetanol + 1 x Non-essential Amino Acids Solution