用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)多胺的熒光試劑PolyamineRED

用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)多胺的熒光試劑PolyamineRED

PolyamineRED是一種與多胺特異性反應(yīng)，并向多胺添加紅色熒光色素TAMRA的試劑。不與單胺或氨基酸反應(yīng)。由于本產(chǎn)品可用于活細(xì)胞，因此能夠簡(jiǎn)單地檢測(cè)出細(xì)胞內(nèi)多胺并進(jìn)行半定量。

※本產(chǎn)品基于國(guó)立研究開(kāi)發(fā)法人 理化學(xué)研究所 開(kāi)拓研究本部 田中生體機(jī)能合成化學(xué)研究室的研究成果商品化。

※本產(chǎn)品僅供科研使用。不可應(yīng)用于臨床。

PolyamineRED擁有細(xì)胞膜透過(guò)性，在細(xì)胞內(nèi)與多胺發(fā)生反應(yīng)并將TAMRA偶聯(lián)至多胺。由于TAMRA與多胺結(jié)合后會(huì)失去膜透過(guò)性，所以可以通過(guò)清洗去除未反應(yīng)的PolyamineRED，因此可選擇性實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)多胺的可視化。已知多胺會(huì)在癌細(xì)胞中過(guò)量產(chǎn)生，所以使用PolyamineRED可以檢測(cè)出癌細(xì)胞中重要的多胺信號(hào)。詳情請(qǐng)參考應(yīng)用實(shí)例。

◆多胺是什么

多胺是含有兩個(gè)或以上氨基的直鏈烷基胺的總稱(chēng)。已從生物體中鑒定出各種結(jié)構(gòu)的多胺，主要為腐胺（putrescine），亞精胺（Spermidine）和精胺（Spermine）。以亞mM~mM的高濃度存在于哺乳動(dòng)物、微生物、植物的細(xì)胞中。

據(jù)報(bào)導(dǎo)，它在生理pH下顯示聚陽(yáng)離子性，并通過(guò)與DNA / RNA和蛋白的相互作用呈現(xiàn)出各種生理活性。由于癌細(xì)胞中多胺合成基因ornithine decarboxylase (ODC)的過(guò)表達(dá)會(huì)引起多胺的過(guò)量產(chǎn)生，因此多胺有望成為癌癥標(biāo)記物。但是，由于多胺的結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單因而難以分析，僅限于通過(guò)HPLC的低通量分析。

另外，分析多胺必須在細(xì)胞破裂后進(jìn)行去除蛋白和其他小分子的前處理，所以可能會(huì)因前處理產(chǎn)生偏差。因此，無(wú)需前處理便可在活細(xì)胞內(nèi)定量多胺的方法備受期待。

PolyamineRED為理化學(xué)研究所 田中主任研究員等所開(kāi)發(fā)的新型多胺檢測(cè)試劑，是一款特異性標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)多胺的TAMRA并使其可視化的多胺檢測(cè)試劑。

多胺在生物體內(nèi)合成的路徑

◆特點(diǎn)

●　PolyamineRED是一款利用ganansuan炔丙基酯與多胺特異性且快速反應(yīng)的試劑。可通過(guò)在多胺標(biāo)記TAMRA使細(xì)胞內(nèi)多胺可視化。

●　可用羅丹明濾光片組觀察（激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)：560 nm/585 nm）。

●　對(duì)多胺（腐胺，亞精胺，精胺）顯示高特異性，幾乎不與氨基酸或單胺反應(yīng)。

●　擁有細(xì)胞膜透過(guò)性，可用于活細(xì)胞的多胺檢測(cè)。可通過(guò)清洗去除未反應(yīng)試劑，而多胺-TAMRA復(fù)合物因多胺的聚陽(yáng)離子性保留在細(xì)胞內(nèi)。

●　無(wú)需前處理，僅需簡(jiǎn)單地操作即可檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)多胺。

●　可通過(guò)細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度半定量多胺總量。*

●　可觀察細(xì)胞內(nèi)多胺的分布情況。

* 由于可檢測(cè)出多胺總量，所以無(wú)法定量單個(gè)多胺種類(lèi)。

◆應(yīng)用

●　細(xì)胞內(nèi)多胺的半定量

●　評(píng)價(jià)多胺在細(xì)胞內(nèi)的分布情況

◆原著論文

K. Vong, K. Tsubokura, Y. Nakao, T. Tanei, S. Noguchi, S. Kitazume, N. Taniguchi, K. Tanaka, Chem. Commun., 53, 8403～8406 (2017)."Cancer cell targeting driven by selective polyamine reactivity with glycine propargyl esters."

◆操作方法概要

1. 添加終濃度10~30 μM的PolyamineRED至新制備的培養(yǎng)基中。

2. 去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基，使用PBS清洗兩遍。

3. 添加含有PolyamineRED的培養(yǎng)基。

4. 培養(yǎng)10 min以上。

5. 使用PBS清洗細(xì)胞三遍。

6. 甲醛固定后，進(jìn)行任意染色并觀察。

※甲醇固定可能會(huì)導(dǎo)致多胺成分泄漏出細(xì)胞外，因此不建議使用甲醇固定。

◆應(yīng)用實(shí)例

癌細(xì)胞與非癌細(xì)胞的多胺檢測(cè)

使用30 μM的PolyamineRED處理3種癌細(xì)胞（MCF7，MDA-MB-231，SK-BR-3）與2種非癌細(xì)胞（MCF10A，淋巴球）10 min，使用PBS清洗三遍，在DAPI染色后用福爾馬林固定細(xì)胞。在癌細(xì)胞中觀察到了TAMRA信號(hào)。另一方面，由于非癌細(xì)胞中的多胺數(shù)量較少，因此在MCF10與淋巴球中幾乎檢測(cè)不出TAMRA信號(hào)。

多胺在細(xì)胞內(nèi)的分布

使用30 μM的PolyamineRED處理MDA-MB-231 10 min后進(jìn)行DAPI染色并固定細(xì)胞。在MDA-MB-231中，細(xì)胞核內(nèi)檢測(cè)出的多胺比細(xì)胞質(zhì)多。使用PolyamineRED，可以評(píng)價(jià)細(xì)胞內(nèi)多胺的分布情況。

參考：gan氨酸炔丙基酯的多胺特異性

使用HPLC追溯gan氨酸炔丙基酯的模型分子（Benzyloxycarbonyl glycine propagyl ester）與多胺（腐胺，亞精胺，精胺），氨基酸以及單胺的反應(yīng)。

僅與多胺（精胺，亞精胺，腐胺）發(fā)生反應(yīng)，而對(duì)單胺（腎上腺素）和氨基酸（賴氨酸）幾乎不反應(yīng)。由此可知，氨基數(shù)越多，對(duì)多胺的反應(yīng)性越高。（引用：原著論文）

※ 本頁(yè)面產(chǎn)品僅供研究用，研究以外不可使用。